Mycoplasma Detection Kit with UDG PCR Mix and loading Dye (MB000-1591)

Mycoplasma Detection Kit with UDG PCR Mix and loading Dye (MB000-1591)

支原体检测试剂盒

货号

规格

MB000-1591

48rxn

MB000-1592

96 rxn

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支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物,估计有15%~35%的细胞被支原体污染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响,包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变,影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性;支原体难以检测,同时也很难消除,其能轻易地通过0.22μm标准滤膜,同时也能拮抗绝大多数的抗生素,给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期(如每2~3个月)进行支原体污染的检测。许多方法可用于检测支原体,包括肉汤或琼脂培养,直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等,其中,直接PCR法灵敏度高。

为保证PCR结果的准确性,要预防非特异性PCR扩增和污染,常用的措施是采用热启动Taq酶和UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)。

化学修饰Taq酶活性中心被封闭,使得该酶在低温或常温没有活性,因此在加样至PCR扩增前,不会产生由于引物错误配对而形成的非特异性扩增。高温(如95℃)条件下,化学修饰基团会水解脱落,释放全部酶活性,从而实现Taq酶的热启动。最大程度降低非特异扩增和引物二聚体的形成,提高扩增灵敏度和特异性。

UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能选择性水解断裂含有dU的单链或双链 DNA中的尿嘧啶糖苷键,形成有缺失碱基的DNA链,在碱性条件及高温下会进一步水解断裂,从而被消除。本产品选择UDG酶,最佳活性温度为50℃,95℃灭活。

本产品含有化学修饰热启动酶的2×PCR mix,配以dUTP和UDG酶,可最大程度降低非特异扩增和引物二聚体的形成,有效防止PCR产物的交叉污染。同时在PCR管中预先加入上样Loading Dye成份,使PCR前加样处理及后续电泳上样变的更方便,以达到准确检测支原体污染,重复性好,可信度高。