技术信息
  • 传代细胞培养简介

    广义的传代细胞培养一般包括复苏、换液、传代、冻存四个环节,是最基本、最常用的细胞培养技术。传代培养是利用培养细胞进行各种实验的必经过程,同时也是一种将细胞种保存下去的方法,广泛应用于生命科学基础研究和生物医药产业。狭义的传代细胞培养只是指传代过程。
  • 传代细胞培养原理

    细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
  • 传代细胞培养步骤

    1、复苏 
    (1)取适量培养液加入离心管中;
    (2)将冻存的细胞在37℃水浴中快速使其融化;
    (3)将细胞吸入离心管中,1000rpm/min离心5 min,倒去上清液,规定加入培养液,打匀,转移到培养瓶中,即可。
    2、换液 
    (1)将培养瓶中已变色的培养液倒掉;
    (2)用PBS洗涤培养瓶(从没有细胞的一侧倒掉);
    (3)加入新鲜培养液,即可。
    3、传代
    (1)吸除培养瓶内旧培养液,加入适量PBS洗一次。
    (2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。
    (3)置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。
    (4)吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失。如果细胞已脱离瓶底,则直接加入培养液终止消化。
    (5)用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
    (6)计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。或者按照所购买公司推荐的比例传代。
    4、冻存
    (1)预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
    (2)将培养瓶中已变色的培养液倒掉;用适量PBS洗涤一次培养瓶; 
    (3)加入胰酶,静置,待细胞将脱落时,加入适量培养液,将贴壁细胞吹落,吸入到离心管中,1000rpm/min×3min,倒掉上清液,加入1ml冻存液,轻轻吹打成细胞悬液,吸到冻存管中,密封,标记冻存细胞名称和冻存日期。
    (4)放入细胞程序降温盒中,于-80℃冻存过夜。然后转移至液氮中,长期保存。